非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书

 

通用名称： 非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒

商品名称： 无

英文名称： African Swine Fever Virus Antibody ELISA Test Kit

汉语拼音： Feizhouzhuwen Bingdu ELISA Kangti Jianceshijihe

作用与用途

非洲猪瘟（ASF）是猪的一种急性、烈性传染病，发病率高，死亡率高，对养猪业危害巨大，是世界各国重点防范的重大动物疫病。本试剂盒采用间接ELISA方法，用杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组蛋白包被酶标板，通过HRP标记抗体来检测样品中的特异性抗体。本试剂盒适用于检测猪血清、血浆样品中的非洲猪瘟病毒抗体。

主要组份与含量

非洲猪瘟病毒抗原包被板:2块板、5块板

样品稀释液 ：60mL×1、 180mL×1

10倍洗涤液 ：125mL×1 、240mL×1

ASFV HRP标记抗体 ：30mL×1、 70mL×1

TMB 底物液 ：30mL×1 、70mL×1

终止液 ：20mL×1、 40mL×1

阳性对照血清： 3mL×1、 7mL×1

阴性对照血清 ：3mL×1 、7mL×1

封板膜 ：2张 、5张

说明书 ：1份 、1份

注意事项

1） 试剂盒储存条件为2-8℃。开启前应确认其批号及有效期。

2） 过期产品请勿使用，不同批号的试剂盒组份禁止混用。

3） 试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温（25±3℃），使用后放置2-8℃保存。

4） 应注意避免向试剂盒中引入污染。

5） 实验所用仪器（如：微量移液器，恒温培养箱，ELISA洗板机，酶标仪）需要在使用前进行功能检查，确保其可用性、准确性。

6） 所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。

7） 移液器吸头必须一次一换。

8） 未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。

9） 试剂盒中各组份容器只针对该组份使用，不可二次利用。

10） 仅供兽医诊断使用。

用法与判定

1、试剂准备

1） 所有试剂恢复至室温（25±3℃）后使用。

2） 1倍洗涤液的配制 10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释，稀释后的洗涤

液在2-8℃可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水（dH2O）。

2、样品准备

1） 尽量使用新鲜采集的血清或血浆样品。

2） 不能用于检测严重污染或严重溶血的样品。

3） 如果血清或血浆样本浑浊，需离心后取上清进行检测。

4） 检测样品可在2-8℃保存5天，长时间保存需要转移至-20℃或更低温环境中。

3、样品稀释 按50倍稀释样品。在稀释板中每孔加入245μL样品稀释液，各

孔加入5μL血清或血浆样品，充分混匀。禁止稀释阳性对照血清（PC）与阴性对照血清（NC）。

4、操作步骤

1) 将所有组份从试剂盒中取出，在恒温箱（25±3℃）中放置至少60分钟，恢复至室温。

2) 向抗原包被板孔中加入100μL提前在稀释板中稀释后的样品。

3) 向指定孔中分别加入100μL未稀释的阴性对照血清（NC）和阳性对照血清（PC）。

4) 盖上封板膜，室温（25±3℃）下孵育30分钟（±2分钟）。

5) 用ELISA洗板机或微量移液器洗板，弃去孔中液体，每孔加入300μL 1倍洗涤液，洗涤3次。最后一次洗涤后将酶标板在吸水纸上轻轻拍干，严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。

6) 每孔加入100μL AFSV HRP标记抗体。

警告：倒出瓶的HRP标记物禁止再次装入瓶中，以防止

HRP酶受污染而使其活性降低。

7) 盖上封板膜，室温（25±3℃）下孵育30分钟（±2分钟）

8) 重复步骤5）。

9) 每孔中加入100μL TMB底物液。

10) 盖上封板膜，室温（25±3℃）下孵育15分钟（±1分钟）。

11) 每孔中加入50μL终止液，终止酶促反应。

12) 使用450nm波长测量吸光度值。

13) 结果判定与计算。

5、判定 1） 实验成立条件

阳性对照OD450nm平均值＞0.8；

阴性对照OD450nm平均值＜0.2；

如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。

2） 计算方法

NC OD均值=（NC1+NC2）/2 

PC OD均值=（PC1+PC2 ）/2

3） 样品S/P值计算公式

S/P= （样品OD值-NC OD均值 ）/(PC OD均值-NC OD均值)

4） 判定标准

阳性:S/P≥0.4

可疑:0.4 ＞S/P＞0.3

阴性:S/P≤0.3 

检测结果可疑的样品，建议再次检测。