2021年9月28日
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名称:
 
   
   
   
 
  产品名称: 非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒
  产品编号:
  产品规格: 192份、480份
     
 
特效与功效:
 
 

非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书

 

通用名称: 非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒

商品名称:

英文名称: African Swine Fever Virus Antibody ELISA Test Kit

汉语拼音: Feizhouzhuwen Bingdu ELISA Kangti Jianceshijihe

作用与用途

非洲猪瘟(ASF)是猪的一种急性、烈性传染病,发病率高,死亡率高,对养猪业危害巨大,是世界各国重点防范的重大动物疫病。本试剂盒采用间接ELISA方法,用杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组蛋白包被酶标板,通过HRP标记抗体来检测样品中的特异性抗体。本试剂盒适用于检测猪血清、血浆样品中的非洲猪瘟病毒抗体。

主要组份与含量

非洲猪瘟病毒抗原包被板:2块板、5块板

样品稀释液 60mL×1 180mL×1

10倍洗涤液 125mL×1 240mL×1

ASFV HRP标记抗体 30mL×1 70mL×1

TMB 底物液 30mL×1 70mL×1

终止液 20mL×1 40mL×1

阳性对照血清: 3mL×1 7mL×1

阴性对照血清 3mL×1 7mL×1

封板膜 2 5

说明书 1 1

注意事项

1 试剂盒储存条件为2-8℃。开启前应确认其批号及有效期。

2 过期产品请勿使用,不同批号的试剂盒组份禁止混用。

3 试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温(25±3℃),使用后放置2-8℃保存。

4 应注意避免向试剂盒中引入污染。

5 实验所用仪器(如:微量移液器,恒温培养箱,ELISA洗板机,酶标仪)需要在使用前进行功能检查,确保其可用性、准确性。

6 所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。

7 移液器吸头必须一次一换。

8 未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。

9 试剂盒中各组份容器只针对该组份使用,不可二次利用。

10 仅供兽医诊断使用。

用法与判定

1、试剂准备

1 所有试剂恢复至室温(25±3℃)后使用。

2 1倍洗涤液的配制 10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释,稀释后的洗涤

液在2-8℃可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水(dH2O)。

2、样品准备

1 尽量使用新鲜采集的血清或血浆样品。

2 不能用于检测严重污染或严重溶血的样品。

3 如果血清或血浆样本浑浊,需离心后取上清进行检测。

4 检测样品可在2-8℃保存5天,长时间保存需要转移至-20℃或更低温环境中。

3、样品稀释 50倍稀释样品。在稀释板中每孔加入245μL样品稀释液,各

孔加入5μL血清或血浆样品,充分混匀。禁止稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC)。

4、操作步骤

1) 将所有组份从试剂盒中取出,在恒温箱(25±3℃)中放置至少60分钟,恢复至室温。

2) 向抗原包被板孔中加入100μL提前在稀释板中稀释后的样品。

3) 向指定孔中分别加入100μL未稀释的阴性对照血清(NC)和阳性对照血清(PC)。

4) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育30分钟(±2分钟)。

5) ELISA洗板机或微量移液器洗板,弃去孔中液体,每孔加入300μL 1倍洗涤液,洗涤3次。最后一次洗涤后将酶标板在吸水纸上轻轻拍干,严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。

6) 每孔加入100μL AFSV HRP标记抗体。

警告:倒出瓶的HRP标记物禁止再次装入瓶中,以防止

HRP酶受污染而使其活性降低。

7) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育30分钟(±2分钟)

8) 重复步骤5)。

9) 每孔中加入100μL TMB底物液。

10) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育15分钟(±1分钟)。

11) 每孔中加入50μL终止液,终止酶促反应。

12) 使用450nm波长测量吸光度值。

13) 结果判定与计算。

5、判定 1 实验成立条件

阳性对照OD450nm平均值>0.8

阴性对照OD450nm平均值<0.2

如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。

2 计算方法

NC OD均值=NC1+NC2/2 

PC OD均值=PC1+PC2 /2

3 样品S/P值计算公式

S/P= (样品OD-NC OD均值 /(PC OD均值-NC OD均值)

4 判定标准

阳性:S/P0.4

可疑:0.4 S/P0.3

阴性:S/P0.3 

检测结果可疑的样品,建议再次检测。

 
 
   
 
 

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