2024年4月20日
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名称:
 
   
   
   
 
  产品名称: 牛结核病γ-干扰素 ELISA 检测试剂盒
  产品编号:
  产品规格: 192 孔/盒
     
 
特效与功效:
 
牛结核病γ γ- 干扰素 ELISA  检测试剂盒说明书
【兽 用 名称】
通 用 名 ：牛结核病γ-干扰素 ELISA 检测试剂盒
商 品 名 ：无
英 文 名： Bovine Tuberculosis IFN-γ ELISATest Kit
汉语拼音 ：Niujiehebing γ-ganraosu ELISA Jiance Shijihe
【主要组分与含量】
组分 含量 组分 含量
抗原包被板 2 板 酶标记物 1 瓶（20ml/瓶）
牛结核菌素 1 管（1.2ml /管） 20 倍浓缩洗涤液 1 瓶（50ml/瓶）
禽结核菌素 1 管（1.2ml /管） 底物液 A 1 瓶（10ml/瓶）
阳性对照 1 管（1ml/管） 底物液 B 1 瓶（10ml/瓶）
阴性对照 1 管（1ml/管） 终止液 1 瓶（10ml/瓶）
兔抗牛γ-干扰素多克隆抗体 1 瓶（20ml/瓶） 说明书 1 份
无菌 PBS 1 瓶（20ml/瓶）
【 作用与用途 】 用于牛结核病的辅助诊断。
【 注意事项】
（ （1） ） 实验 前 ， 将 试剂盒所有 组分 取 出 置 温箱（ （25℃±3） ）少 回温至少 30  分钟 ，回 实验完成后放回 2 ～8℃保 保
存。
（2）若试剂盒阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物，属正常现象。
（3）请在试剂盒规定的有效期内使用；禁止非同批试剂盒混用。
（4）没有用完的抗原包被板应贮存在密封塑料袋内，于 2～8℃存放。
（5）避免底物液 B 暴露于强光，避免接触氧化剂。
（6）浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
（7）严格按照操作程序，仔细的吸液、计时，充分洗涤，对于获得精确的结果是非常必要的。
【用法与判定】
1 用法
1.1 样本制备 待检样本按如下方法制备：
1.1.1 采血 无菌采集牛全血 5ml，肝素钠抗凝，室温条件下 36 小时内送达实验室进行刺激培养。
培养试验开始前准备无菌清洁的 2ml 平底离心管和无菌 PBS。
1.1.2 血液分装 分装前应将装有抗凝血的采血管上下轻轻颠倒 5～10 次，充分混匀血液样本。将
每份抗凝血加入 3 个 2ml 离心管中，1ml/管。
1.1.3 结核菌素工作液配制 按每个样本所需 100μl 结核菌素工作液（ （ 临用前 按 无菌 操作 配制） ），将
牛结核菌素（bPPD）和禽结核菌素(aPPD)作 5 倍稀释（例如：20μl 结核菌素与 80μl 无菌 PBS 混合）。
1.1.4 抗原刺激 将牛结核菌素（bPPD）、禽结核菌素（aPPD）工作液（2 种刺激抗原）和 PBS（无
刺激抗原对照）按无菌操作各取 100μl 依次加入 1.2 项中的 3 支离心管中。盖严，轻轻摇动离心管，使血
液与刺激抗原或 PBS 充分混合，置 37℃培养 16～20 小时，获得 2 种抗原刺激的血液培养上清和 PBS 血
液培养上清，如果上清不足 100μl，可 2000 转/min 离心 5 分钟。
兽用非处方药
1.1.5 样本贮存 如果不立即检测上述血液培养上清，可收集后低温保存，检测时先将样本恢复至
室温。上清在 2～8℃可保存 7 日，在-20℃以下可保存 3 个月。
1.2 洗涤液配制 使用前，将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水作 20 倍稀释（例如：10ml 的浓缩洗
涤液加上 190ml 纯水），混匀。置 2～8℃保存，可保存 7 日。
1.3 操作步骤
1.3.1 取出抗原包被板，平衡至室温（根据样本多少，可拆开分次使用），按样本布局表加入刺激后
的血液培养上清样本，100μl/孔；同时设阳性对照（PC）、阴性对照（NC）各 2 孔（阴阳性对照不稀释），
100μl/孔，置 37℃温育 45 分钟。
1.3.2 甩掉板孔中的液体，每孔加入稀释好的洗涤液 300µl，无需静置，甩掉板孔中的洗涤液，重复
洗涤共计 3 次，最后一次在吸水材料上拍干。
1.3.3 每孔加入兔抗牛γ-干扰素多克隆抗体 100μl，置 37℃温育 30 分钟。
1.3.4 洗板 3 次，方法同 1.3.2。
1.3.5 每孔加入酶标记物 100μl，置 37℃温育 30 分钟。
1.3.6 洗板 5 次，方法同 1.3.2。
1.3.7 每孔先加入底物液 A 50µl，再加入底物液 B 50µl，混匀，置室温（20~25℃）避光显色 10 分
钟。
1.3.8 每孔加入终止液 50µl，10 分钟内，在酶标仪上测定各孔 OD 630nm 值。
2 判定
2.1 成立条件 阳性对照（PC）OD 630nm 平均值≥1.0，阴性对照（NC）OD 630nm 平均值＜0.3。
2.2 判定标准 bPPD 血液培养上清孔 OD 630nm 值记作 OD bPPD ，aPPD 血液培养上清孔 OD 630nm 值记
作 OD aPPD ，PBS 血液培养上清孔 OD 630nm 值记作 OD PBS ，计算 OD bPPD 、OD aPPD 及 OD PBS 之间的差值。
OD bPPD -OD PBS ≥0.2 且 OD bPPD -OD aPPD ≥0.2 判为牛结核病阳性；其它情形均判为牛结核病阴性。
【规 格】 192 孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存，有效期为 10 个月
 
 
   
 
 

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