布鲁氏菌 cELISA 抗体检测试剂盒说明书

【 兽用名称 】

通 用 名 ：布鲁氏菌 cELISA 抗体检测试剂盒

商 品 名 ：无

英 文 名： cELISA Kit for Detection of Brucella Antibody

汉语拼音 Bulushijun cELISA Kangti Jiance Shijihe

【 主要 组 分与含量 】

组分 含量

（1）抗原包被板 1 板

（2）阳性对照 1 管（100μl/管）

（3）阴性对照 1 管（100μl/管）

（4）单克隆抗体 1 瓶

（5）酶标记物 1 瓶（12ml/瓶）

（6）20 倍浓缩洗涤液 1 瓶（20ml/瓶）

（7）底物显色液 1 瓶（12ml/瓶）

（8）终止液 1 瓶（6ml/瓶）

（9）血清稀释板 2 张

（10）封板膜 1 板

（11）说明书 1 份

【 作用与用途 】 用于检测光滑型牛、羊布鲁氏菌血清抗体。

【注意事项】

（ （1） ） 实 验 前，将 试剂盒所有 组分 取 出 置 温箱（ （25℃±3 ）回温至少 30  分钟 ，实验完成

回 后放回 2 ～8℃ 保存。

（2）阳性对照、阴性对照及酶标记物在使用前先要低速（500～1000 转）离心 3～

5 秒，使其集中于管底。

（3）不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用过程中，各试剂组分应避免交叉污染。

（4）避免底物显色液暴露于强光和接触氧化剂。

（5）终止液中含有 H 2 SO 4 ，使用时注意不要接触到身体，衣物。

（6）没有用完的抗原包被板应贮存在密封塑料袋内，于 2～8℃存放。

（7）先使用血清稀释板稀释完所有的待检测血清，再将稀释好的血清转移到抗原包被

板上。使反应时间一致。

（8）浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用

（9）严格按照操作程序，仔细的吸液、计时，充分洗涤，对于获得精确的结果是非常

必要的。

兽用非处方药

【 用法与判定 】

1 用法

1.1 洗涤液配制 使用前，将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水或纯水作 20 倍稀释（例如：

10ml 的浓缩洗涤液加 190ml 纯水），混匀，置 2～8℃可保存 7 日。

1.2 样品稀释液为稀释好的洗涤液。

1.3 待 检血清 和 对照 的 稀释 将阴性、阳性对照以及待检血清在血清稀释板中 用稀释

好的按 洗涤液按 1:10  稀释（例如：180μl 样品稀释液中加 20μl 待检血清）， ，室温放置备用 。

1.4 单克隆抗体配制 用 1×洗涤液 6ml 溶解冷冻干燥的单克隆抗体，使用前 30 min 放

置于室温下备用。

2 操作步骤

2.1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的洗涤液 300μl，

无需静置，甩掉孔中的洗涤液，共计洗涤 4 次，最后一次在吸水材料上拍干。

2.2 先将稀释好的待检血清、阳性对照、阴性对照和无血清空白对照（1×洗涤液）各

取 50μl 加入到抗原包被板中，待检血清设 1 孔，阳性对照、阴性对照和无血清空白对照各

设 2 孔，再立即加入稀释好的单克隆抗体溶液 50μl，轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置室

温（20～25℃）反应 45 分钟。

2.3 甩掉板孔中的液体，每孔加入稀释好的洗涤液 300μl，无需静置，甩掉孔中的洗涤

液，共计洗涤 4 次，最后一次在吸水材料上拍干。

2.4 每孔加入酶标记物 100μl，置室温（20～25℃）反应 45 分钟。。

2.5 洗涤 5 次，方法同 1.5.3。

2.6 每孔加入底物显色液 100µl，置室温（20～25℃）避光显色 10 分钟。

2.7 每孔加入终止液 50µl，设置酶标仪测量波长为 450nm，15 分钟内测定各孔 OD 450nm

值

3 结果判定

3.1 成立条件 各对照的测定值在如下范围内时，试验有效：

无血清空白对照 OD 450nm 0.75～2.0

阳性对照抑制率（PI） 80%～100%

阴性对照抑制率（PI） -15%～15%

3.2 判定标准 计算样品抑制率

抑制率（PI）=（空白对照 OD 450nm ―检测样品 OD 450nm ）／空白对照 OD 450nm ×100%。

抑制率（PI）≥30%判为阳性，抑制率（PI）＜30%判为阴性。

【规 格】 96 孔/盒

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为 10 个月