2024年3月29日
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名称:
 
   
   
   
 
  产品名称: 改进型口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒
  产品编号:
  产品规格: 5块96反应孔
     
 
特效与功效:
 
 

改进型口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒

兽药名称

  改进型口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒

 

Improved Liquid Phase Blocking ELISA Kit for Detecting Antibodies of Foot and Mouth Disease Virus Type O

汉语拼音  Gaijinxing Koutiyi Bingdu O Xing Kangti Yexiangzuduan ELISA Jiance Shijihe

【试剂盒组成】

  

 

 

 

兔抗包被ELISA

5

25PBST浓缩液

160ml

移液槽

3

终止液

1瓶(30ml

口蹄疫O型病毒抗原

12瓶×6ml

TMB底物A溶液

1瓶(15ml

抗原稀释

1瓶(30ml

TMB底物B溶液

1瓶(15ml

口蹄疫O型酶标抗体工作液

1瓶(30ml

封板膜

5

口蹄疫O型阳性对照血清(已稀释浓度为1:8

1管(1ml

说明书

1

口蹄疫阴性对照血清

1管(1ml

 

 

 

【试剂工作浓度】

  

工作浓度

口蹄疫O型病毒抗原

 

【用  途】 用于检测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫O型病毒抗体,适用于动物疫苗免疫抗体定量检测。

器材准备

1. 移液器: 10-100µl移液器、30-300 µl移液器、100-1000 µl 移液器各一把。

2. 水质要求:无离子水或蒸馏水均可。

试剂准备

磷酸盐-吐温缓冲液(PBST):实验操作前,将本试剂盒配备的25PBST浓缩液用无离子水或蒸馏水稀释成1PBST1份浓缩液加入24份水进行稀释)进行洗板血清稀释。

操作步骤

1.抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应: 根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在酶标板上操作。图1为抗体效价测定(定量)检测10份样品布局图;图2为抗体效价测定(定量)检测20份样品布局图。

11稀释血清:以图1为例操作,酶标板上,以50µl /孔的量用 PBST 2倍连续稀释血清,被检血清在第110列从1:4(即A1A10孔,75µl PBST25µl被检血清)稀释至1:512;在第11列稀释阳性对照血清,从1:2(即A1150µl PBST50µl阳性对照血清)稀释至1:256A12B12孔稀释阴性对照血清,从1:2稀释至1:4E12H12孔为病毒抗原对照孔。

1  96孔酶标板检测10份样品布局图

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:8

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

+1:32

- 1:4

B

1:16

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:64

1:8

C

1:32

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:128

 

D

1:64

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:256

 

E

1:128

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:512

病毒抗原对照

 

F

1:256

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:1024

 

G

1:512

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:2048

 

H

1:1024

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:4096

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2  96孔酶标板检测20份样品布局图

 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:16

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

+1:32

- 1:4

B

1:32

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:64

1:8

C

1:64

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:128

 

D

1:128

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:256

 

E

S11 1:16

S12

S13

S14

S15

S16

S17

S18

S19

S20

1:512

病毒抗原对照

 

F

1:32

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:1024

 

G

1:64

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:2048

 

H

1:128

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1:4096

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.2加病毒抗原:将病毒抗原用抗原稀释液稀释至工作浓度,以50µl /孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内,4孔病毒抗原对照孔仅加入100µl /孔稀释至工作浓度的病毒抗原。加入等量的病毒抗原后,血清的稀释度加倍,被检血清从1:81:1024,由于阳性对照血清已经预先作了8倍稀释,则变为1:321:4096。封板,振荡, 37℃温育30分钟。

2. PBST连续洗板3~5次,干,按50µl/孔加口蹄疫O型酶标抗体工作液(色),封板,37温育30分钟。

3. PBST连续洗板3~5次,干。将TMB底物A溶液和B溶液1:1比例混匀,加入混匀后的底物溶液50µL/孔,置37显色15分钟。

4. 显色反应结束后,加终止液50µL/孔,终止反应,在酶标仪上读取D450nm值。

结果判定

1.试验认可标准

每块板设4孔病毒抗原对照,病毒抗原对照D450nm值应在1.0以上。阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内,阴性对照血清抗体效价应<1:8

2.血清抗体效价的判定

病毒抗原对照4孔,弃去最高和最低D450nm值,计算剩余2孔的平均D450nm值,再除以2,即50%对照值,该值即为临界值,表示阻断50%反应的对照D450nm值。被检血清D450nm值大于临界值的孔为阴性孔,小于等于临界值的孔为阳性孔。若临界值与稀释倍数最高阳性孔的D450nm值相同,则以被检血清阳性孔的最高稀释倍数作为该份血清的抗体效价;若临界值处于两个稀释孔D450nm值之间,抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值,如处于1:64(反对数值为1.8)与1:128(反对数值为2.1)之间,则判定该份血清的抗体效价为1:90(反对数值为1.95),具体判定可见抗体效价计算对照表。

3.结果判定

抗体效价大于或等于1:128判为口蹄疫O型抗体阳性;1:641:128时,判为可疑;小于1:64,判定为阴性。可疑血清样品,可以重测,重测抗体效价大于或等于1:128,判为阳性,小于1:128判为阴性。

4. ELISA抗体效价与免疫动物攻毒保护的关系

牛、羊:抗体效价1:12899%以上保护;效价1:16,不保护;效价在1:2290之间,50%保护。

猪:1:6499%以上保护;效价<1:4,不保护;效价在1:44550%保护。

抗体效价计算对照表

抗体

效价

Log10(效价)

对照计算

抗体

效价

Log10(效价)

对照计算

抗体

效价

Log10(效价)

对照计算

1:4

0.6

1:32

1.5

1:256

2.4

1:6

0.75

1:45

1.65

1:360

2.55

1:8

0.9

1:64

1.8

1:512

2.7

1:11

1.05

1:90

1.95

1:720

2.85

1:16

1.2

1:128

2.1

1:1024

3

1:22

1.35

1:180

2.25

1:1440

3.15

 

【注意事项】

1. 为使您的检测获得正确结果,请您在实验前仔细阅读本说明书。

2. 兔抗包被ELISA板,打开真空包装后需尽快用完。

3. 本试剂盒配备的25PBST浓缩液在低温放置下,可能有无机盐结晶,用前微热溶化

4. TMB底物AB溶液为无色透明液体,应避光保存;底物溶液使用时应现用现配,如出现变色,弃去不用。

5. 根据底物显色情况,可以适当缩短显色时间。

6. 底物显色终止后尽量在30分钟内进行酶标板读值

【规    格】 5ELISA板,已包被兔抗O型口蹄疫病毒抗体,可检测50100份样品。

    藏】 口蹄疫O型病毒抗原:-20℃以下保存(-40℃以下更稳定);其余试剂盒组分放置4℃保存。

【有 期】 6个月。

【生产单位】 兰州兽研生物科技有限公司

 

仅供兽医诊断使用

 

附录:试剂盒的溶液配方

 

 

1×PBST配方

NaCl                8.0g

KCl                0.2g

KH2PO4               0.2g

Na2HPO4 12H2O      2.9g

Tween20         0.5ml

加无离子水至1L,调整pH7.4

 

 

 

 
 
   
 
 

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