2020年11月29日
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名称:
 
   
   
   
 
  产品名称: 猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型实时荧光RT-PCR联检试剂盒
  产品编号:
  产品规格: 50T/盒
     
 
特效与功效:
 

猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型实时荧光RT-PCR联检试剂盒说明书
【产品名称】 
通用名称:猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒2型实时荧光RT-PCR联检试剂盒
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂盒采用探针法实时荧光RT-PCR 技术,用于检测疑似感染猪血液、分泌物及病料组织样本中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA或RNA,检测结果可用于临床中上述病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用Taqman探针技术,对PRRSV、PRV、CSFV、PCV2基因组的保守区分别设计探针引物并标记不同荧光基团,配以高效的反应液进行RT-PCR,应用实时荧光PCR检测平台,通过荧光信号的变化实现样本中PRRSV、PRV、CSFV、PCV2的快速检测。

【主要组成成份】
试剂名称  规格与装量  主要成分
PRRSV-PRV-CSFV-PCV2反应液  1075μL/管×2管  引物、探针、dNTP、Mg2+、PCR缓冲液等
RNA 酶混合液 100μL/管×1管  反转录酶、热启动Taq酶等
PRRSV-PRV-CSFV-PCV2阳性对照 50μL/管×1管  含PRRSV、PRV、CSFV、PCV2保守位点阳性核酸序列
PRRSV-PRV-CSFV-PCV2阴性对照  500μL/管×1管 灭菌TE溶液
   备注:
1)不同批号产品的成分之间不可以混用或互换。
2)试剂盒内的生物样本均已经灭活处理。
3)自备试验器材:DNase/RNase-free处理的1.5 mL离心管、0.2 mL PCR反应管(8联管或96孔板);台式离心机;台式震荡混合器;分离器及各种规格的移液器及灭菌吸头(10μL,200μL,1000μL)。
【储存条件及有效期】
试剂应避光密闭储存于-20±5℃;试剂盒有效期为12个月,避免反复冻融。
【适用仪器】
适用于宏石Slan-48P/96P、ABI系列、安捷伦Mx3000P、Bio-rad CFX系列等荧光PCR仪。
【样本要求】
1 适用样本类型:血液、分泌物、拭子及病料组织样本经提取纯化后的核酸。
2 样本处理:建议使用商业化的试剂盒提取样本中的RNA。所提取的核酸建议立即进行检测,否则请于-20℃±5℃冻存,保存时间不超过6个月。
【检验方法】
1 试剂准备(在试剂准备区进行)
1.1 取出包装盒中的各组分(酶除外),室温放置,待其温度平衡至室温,混匀后瞬时离心备用;
1.2根据待测样本、阴性对照以及阳性对照数量,按比例(PRRSV-PRV-CSFV-PCV2反应液43μL/测试+RNA 酶混合液2μL/测试)取相应量的试剂,充分混匀成PCR-Mix,瞬时离心后备用。
1.3 将上述准备好的试剂转移至样本处理区,待用。
2样本处理及加样 (在样本处理区进行)
2.1 根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量准备反应管,向每个反应管加入45μL PCR-Mix。
2.2 取经处理的待测样本核酸、或阴性对照、或阳性对照各5μL加入对应反应管,盖好管盖,转移至扩增区。
3 PCR扩增(在扩增与分析区进行,请参照各仪器使用说明书进行设置)
3.1将PCR反应管放入扩增仪,按对应顺序设置阴性对照、阳性对照以及待测样本名称。
3.2 荧光检测通道选择:1)选择FAM通道检测PRRSV核酸;2)选择HEX通道检测PRV核酸;3)选择ROX通道检测CSFV核酸;4)选择CY5通道检测PCV2核酸;5)设置反应体系为50μL。

3.3 循环参数设定:

步骤 温度  时间 循环数
1 逆转录  50℃  30分钟 1
2 cDNA预变性   95℃ 2分钟 1
3 变性 95℃ 15秒 40
4 退火,延伸及荧光采集  60℃  30秒 40
5 仪器冷却 25℃  10 秒 1

设置完毕,保存文件,运行反应程序。
4 结果分析(请参照各仪器使用说明书进行设置)
4.1 反应结束后自动保存结果,仪器将对结果进行自动分析,给出Ct值。注意查看结果的扩增曲线的形状,存在Ct值的结果需呈S型曲线。
4.2 用户也可根据实际情况自行调整,基线起点值可以在3~15、基线终点值可设在5~20,调整阴性对照的扩增曲线使其平直或低于阈值线,使各项参数符合下述“5 质量控制”中的要求。
5 质量控制
5.1 PRRSV-PRV-CSFV-PCV2 阴性对照:FAM通道、HEX通道、ROX通道和CY5通道均无Ct值显示或典型扩增曲线;
5.2 PRRSV-PRV-CSFV-PCV2 阳性对照:FAM通道、HEX通道、ROX通道和CY5通道Ct值≤30,且具有典型扩增曲线;
5.3 以上要求需在同一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,需重新进行。
【检验结果的解释】
1 对于测定FAM 通道Ct值≤35且扩增曲线为典型的S型,报告为PRRSV核酸检测阳性;FAM通道35<Ct值≤40,报告可疑;FAM通道无Ct值显示或典型扩增曲线,报告PRRSV核酸检测阴性。
2 对于测定HEX通道Ct值≤38且扩增曲线为典型的S型,报告为PRV核酸检测阳性;HEX通道38<Ct值≤40,报告可疑;HEX通道无Ct值显示或典型扩增曲线,报告PRV核酸检测阴性。
3 对于测定ROX 通道Ct值≤35且扩增曲线为典型的S型,报告为CSFV核酸检测阳性;ROX通道35<Ct值≤40,报告可疑;ROX通道无Ct值显示或典型扩增曲线,报告CSFV核酸检测阴性。
4 对于测定Cy5 通道Ct值≤38且扩增曲线为典型的S型,报告为PCV2核酸检测阳性;Cy5通道38<Ct值≤40,报告可疑;Cy5通道无Ct值显示或典型扩增曲线,报告PCV2核酸检测阴性。
5 初次检测判定可疑的结果应进行一次重复检测,如无Ct值显示,则报告该通道对应病原核酸阴性,反之则报告阳性。
【检测方法的局限性】
1 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确,可能导致试剂检测性能下降,出现假阴性或定量不准确的结果。
2 如果样本处理时没有控制好交叉污染,可能出现假阳性结果;
3 阳性对照、扩增产物泄漏,可能导致假阳性结果;
4 病原体流行毒株发生变异,可能导致假阴性结果;
5 不同核酸提取方法存在提取效率差异,可能导致假阴性结果。
【产品性能指标】
本试剂盒检测企业工作参考品,阴、阳性符合率均为100%;精密度试验表明:批内和批间重复性好,检测结果Ct值的变异系数均<3%。与感染部位相同或感染症状相似的其他病毒无交叉反应。
【注意事项】
1 本试剂盒检测结果仅做诊断辅助,使用前请仔细阅读本说明书。
2 实验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项,对每次实验进行质量控制。
3 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范,实验人员必须进行专业培训,实验过程严格分区进行,所用消耗品应灭菌后一次性使用,实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备,各区各阶段用品不能交叉使用。
4 所有的试剂在使用前,均需在室温下充分融化、混匀后使用。
【生产企业】
企业名称:湖南国测生物科技有限公司
生产地址:长沙市宁乡高新区湖南省大学科技产业园1栋
公司网址:www.xnfyzr.com   邮    编:410000
电    话:0731-89516668    传    真: 0731-89516669

 
 
   
 
 

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