2020年11月29日
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名称:
 
   
   
   
 
  产品名称: 副猪嗜血杆菌实时荧光PCR检测试剂盒
  产品编号:
  产品规格: 50T/盒
     
 
特效与功效:
 
副猪嗜血杆菌实时荧光PCR检测试剂盒说明书
【产品名称】 
通用名称:副猪嗜血杆菌实时荧光PCR检测试剂盒
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂用于检测组织病料、拭子、分泌物、血液及培养物中的副猪嗜血杆菌(HPS)的DNA,检测结果可用于临床中HPS感染的辅助诊断。
【检验原理】
1本试剂盒采用Taqman探针技术,对HPS基因组的保守区设计探针引物并标记不同荧光基团,配以相应试剂进行聚合酶链式反应(PCR),应用实时荧光定量PCR检测平台,通过荧光信号的变化实现对样品中HPS核酸的快速检测。
2 本试剂盒荧光PCR体系中含有内置参照(内标),通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物,避免PCR假阴性。
【主要组成成份】
试剂名称   规格与装量 主要成分
HPS-反应液   950μL/管×2管 引物、探针、dNTP、Mg2+、PCR缓冲液等
DNA 酶混合液  100μL/管×1管  热启动Taq聚合酶
HPS-阳性对照   50μL/管×1管 含HPS基因组保守位点阳性核酸序列
HPS-阴性对照   500μL/管×1管 灭菌生理盐水
HPS-内置对照   50μL/管×1管 含内置参照(内标)
核酸释放剂   250μL /管×1管 十二烷基硫酸锂,氯化钠等

备注:
1)不同批号产品的成分之间不可以混用或互换。
2)试剂盒内的生物样本均已经灭活处理。
3)自备试验器材:DNase/RNase-free处理的1.5 mL离心管、0.2 mL PCR反应管(8联管或96孔板);台式离心机;台式震荡混合器;分离器及各种规格的移液器及灭菌吸头(10μL,200μL,1000μL)。
【储存条件及有效期】
试剂应避光密闭储存于-20±5℃;试剂盒有效期为12个月,避免反复冻融。
【适用仪器】
适用于宏石Slan-48P/96P、ABI系列、安捷伦Mx3000P、Bio-rad CFX系列等荧光PCR仪。
【样本要求】
1 适用样本类型:组织病料、拭子、分泌物、血液样本及培养物等。
2 样本处理:
2.1 组织样品处理:取约1g组织病料,于研磨器具中研磨,加入1.2mL生理盐水研磨至匀浆,转移至1.5 mL离心管,取悬液以生理盐水稀释10倍后待用。
2.2 无溶血的血清或血浆、培养物:无需预处理。
2.3 其它样本类型:建议使用商业化核酸提取试剂盒进行DNA的提取和纯化。所提取的核酸建议立即进行检测,否则请于-20℃±5℃冻存,保存时间不超过6个月。
【检验方法】
1 试剂准备(在试剂准备区进行)
1.1 取出包装盒中的各组分(酶除外),室温放置,待其温度平衡至室温后,混匀后瞬时离心备用;
1.2根据待测样本、阴性对照以及阳性对照数量,按比例(HPS-反应液38μL/测试+DNA 酶混合液2μL/测试+ HPS-内置参照0.5μL/头份)取相应量的试剂,充分混匀成PCR-Mix,瞬时离心后备用。
1.3 将上述准备好的试剂转移至样本处理区,待用。
2样本处理及加样 (在样本处理区进行)
2.1 向每个反应管中加入5μL核酸释放剂;
2.2 取阴性对照、阳性对照与待测样本各5μL分别加入对应PCR反应管,混匀后室温静置10min;
2.3 向每个反应管中分别加入40μL PCR-Mix,盖上管盖,短暂离心,转移至扩增区。盖好管盖,转移至扩增区。

3 PCR扩增(在扩增与分析区进行,请参照各仪器使用说明书进行设置)
3.1将PCR反应管放入扩增仪,按对应顺序设置阴性对照、阳性对照以及待测样本名称。
3.2 荧光检测通道选择: (1)选择FAM通道检测HPS核酸;(2)选择HEX或VIC通道检测内置参照。(3)设置反应体系为50μL。
3.3 循环参数设定:

 
步骤 温度  时间 循环数
1 逆转录  50℃  30分钟 1
2 cDNA预变性   95℃ 2分钟 1
3 变性 95℃ 15秒 40
4 退火,延伸及荧光采集  60℃  30秒 40
5 仪器冷却 25℃  10 秒 1

设置完毕,保存文件,运行反应程序。
4 结果分析(请参照各仪器使用说明书进行设置)
4.1 反应结束后自动保存结果,仪器将对结果进行自动分析,给出Ct值。注意查看结果的扩增曲线的形状,存在Ct值的结果需呈S型曲线。
4.2 用户也可根据实际情况自行调整,基线起点值可以在3~15、基线终点值可设在5~20,调整阴性对照的扩增曲线使其平直或低于阈值线,使各项参数符合下述“5 质量控制”中的要求。
5 质量控制
5.1 HPS-阴性对照:FAM通道无Ct值显示或典型的扩增曲线,且HEX通道Ct值≤36;
5.2 HPS-阳性对照:FAM通道Ct值≤30,且具有典型的扩增曲线;
5.3 以上要求需在同一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,需重新进行。
【检验结果的解释】
1 测定FAM 通道Ct值≤35,且具有典型的扩增曲线,报告为HPS阳性;
2 测定FAM 通道35<Ct值≤40,且具有典型的扩增曲线,报告HPS可疑,应重新进行检测,如复检无Ct值,则报告HPS阴性,反之报告阳性。
3 测定FAM 通道无Ct值显示或者典型的扩增曲线,同时HEX通道Ct值≤36,报告为HPS阴性;若HEX通道Ct值> 36或无显示,则该样本的检测结果无效,应查找并排除原因,并对此样本进行重复实验。
【检测方法的局限性】
1 样本检测结果与试剂盒运输、样本收集、处理、运送及保存质量有关;
2 如果样本处理时没有控制好交叉污染,可能出现假阳性结果;
3 阳性对照、扩增产物泄漏,可能导致假阳性结果;
4 病原体流行毒株发生变异,可能导致假阴性结果;
5 不同核酸提取方法存在提取效率差异,可能导致假阴性结果;
6 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确,可能导致试剂检测性能下降,出现假阴性或定量不准确的结果;
【产品性能指标】
本试剂盒检测企业工作参考品,阴、阳性符合率均为100%;精密度试验表明:批内和批间重复性好,检测结果Ct值的变异系数均<3%。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原无交叉反应。
【注意事项】
1本试剂盒检测结果仅做诊断辅助,使用前请仔细阅读本说明书。
2 实验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项,对每次实验进行质量控制。
3 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范,实验人员必须进行专业培训,实验过程严格分区进行,所用消耗品应灭菌后一次性使用,实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备,各区各阶段用品不能交叉使用。
4 所有的试剂在使用前,均需在室温下充分融化、混匀后使用。
【生产企业】
企业名称:湖南国测生物科技有限公司
生产地址:长沙市宁乡高新区湖南省大学科技产业园1栋
公司网址:www.xnfyzr.com   邮    编:410000
电    话:0731-89516668    传    真: 0731-89516669

 
 
   
 
 

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