备注：
1）不同批号产品的成分之间不可以混用或互换。
2）试剂盒内的生物样本均已经灭活处理。
3）自备试验器材：DNase/RNase-free处理的1.5 mL离心管、0.2 mL PCR反应管（8联管或96孔板）；台式离心机；台式震荡混合器；分离器及各种规格的移液器及灭菌吸头（10μL，200μL，1000μL）。
【储存条件及有效期】
试剂应避光密闭储存于-20±5℃；试剂盒有效期为12个月，避免反复冻融。
【适用仪器】
适用于宏石Slan-48P/96P、ABI系列、安捷伦Mx3000P、Bio-rad CFX系列等荧光PCR仪。
【样本要求】
1 适用样本类型：组织病料、拭子、分泌物、血液样本及培养物等。
2 样本处理：
2.1 组织样品处理：取约1g组织病料，于研磨器具中研磨，加入1.2mL生理盐水研磨至匀浆，转移至1.5 mL离心管，取悬液以生理盐水稀释10倍后待用。
2.2 无溶血的血清或血浆、培养物：无需预处理。
2.3 其它样本类型：建议使用商业化核酸提取试剂盒进行DNA的提取和纯化。所提取的核酸建议立即进行检测，否则请于-20℃±5℃冻存，保存时间不超过6个月。
【检验方法】
1 试剂准备（在试剂准备区进行）
1.1 取出包装盒中的各组分（酶除外），室温放置，待其温度平衡至室温后，混匀后瞬时离心备用；
1.2根据待测样本、阴性对照以及阳性对照数量，按比例（HPS-反应液38μL/测试+DNA 酶混合液2μL/测试+ HPS-内置参照0.5μL/头份）取相应量的试剂，充分混匀成PCR-Mix，瞬时离心后备用。
1.3 将上述准备好的试剂转移至样本处理区，待用。
2样本处理及加样 （在样本处理区进行）
2.1 向每个反应管中加入5μL核酸释放剂；
2.2 取阴性对照、阳性对照与待测样本各5μL分别加入对应PCR反应管，混匀后室温静置10min；
2.3 向每个反应管中分别加入40μL PCR-Mix，盖上管盖，短暂离心，转移至扩增区。盖好管盖，转移至扩增区。

3 PCR扩增（在扩增与分析区进行，请参照各仪器使用说明书进行设置）
3.1将PCR反应管放入扩增仪，按对应顺序设置阴性对照、阳性对照以及待测样本名称。
3.2 荧光检测通道选择: （1）选择FAM通道检测HPS核酸；（2）选择HEX或VIC通道检测内置参照。（3）设置反应体系为50μL。
3.3 循环参数设定：

 

	步骤	温度	时间	循环数
1	逆转录	50℃	30分钟	1
2	cDNA预变性	95℃	2分钟	1
3	变性	95℃	15秒	40
4	退火，延伸及荧光采集	60℃	30秒	40
5	仪器冷却	25℃	10 秒	1

设置完毕，保存文件，运行反应程序。
4 结果分析（请参照各仪器使用说明书进行设置）
4.1 反应结束后自动保存结果，仪器将对结果进行自动分析，给出Ct值。注意查看结果的扩增曲线的形状，存在Ct值的结果需呈S型曲线。
4.2 用户也可根据实际情况自行调整，基线起点值可以在3~15、基线终点值可设在5~20，调整阴性对照的扩增曲线使其平直或低于阈值线，使各项参数符合下述“5 质量控制”中的要求。
5 质量控制
5.1 HPS-阴性对照：FAM通道无Ct值显示或典型的扩增曲线，且HEX通道Ct值≤36；
5.2 HPS-阳性对照：FAM通道Ct值≤30，且具有典型的扩增曲线；
5.3 以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
【检验结果的解释】
1 测定FAM 通道Ct值≤35，且具有典型的扩增曲线，报告为HPS阳性；
2 测定FAM 通道35＜Ct值≤40，且具有典型的扩增曲线，报告HPS可疑，应重新进行检测，如复检无Ct值，则报告HPS阴性，反之报告阳性。
3 测定FAM 通道无Ct值显示或者典型的扩增曲线，同时HEX通道Ct值≤36，报告为HPS阴性；若HEX通道Ct值> 36或无显示，则该样本的检测结果无效，应查找并排除原因，并对此样本进行重复实验。
【检测方法的局限性】
1 样本检测结果与试剂盒运输、样本收集、处理、运送及保存质量有关；
2 如果样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果；
3 阳性对照、扩增产物泄漏，可能导致假阳性结果；
4 病原体流行毒株发生变异，可能导致假阴性结果；
5 不同核酸提取方法存在提取效率差异，可能导致假阴性结果；
6 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确，可能导致试剂检测性能下降，出现假阴性或定量不准确的结果；
【产品性能指标】
本试剂盒检测企业工作参考品，阴、阳性符合率均为100%；精密度试验表明：批内和批间重复性好，检测结果Ct值的变异系数均<3%。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原无交叉反应。
【注意事项】
1本试剂盒检测结果仅做诊断辅助，使用前请仔细阅读本说明书。
2 实验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项，对每次实验进行质量控制。
3 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行，所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用。
4 所有的试剂在使用前，均需在室温下充分融化、混匀后使用。
【生产企业】
企业名称：湖南国测生物科技有限公司
生产地址：长沙市宁乡高新区湖南省大学科技产业园1栋
公司网址：www.xnfyzr.com   邮    编：410000
电    话：0731-89516668    传    真： 0731-89516669