兽药名称
通用名称：猪乙型脑炎病毒（JEV）ELISA抗体检测试剂盒 商品名称：无
英文名称：Swine Japanese Encephalitis Virus（JEV）Ab ELISA kit
汉语拼音：Zhu Yixingnaoyan Bingdu ELISA kangti Jiance
作用与用途
日本乙型脑炎病毒（JEV）为黄病毒科黄病毒属成员，是一 种可通过库蚊传播、造成人畜共患的病毒，其感染人可引起脑 炎，感染猪只会造成生殖系统疾病，如流产、死胎等。在流行该 病的地区，该病毒在自然界中主要在蚊虫、家禽、野鸟、猪和人 类中循环传播。猪是该病毒最主要的增殖宿主和传染源。本试 剂盒可用于监测猪血清中的JEV特异性抗体，其检测结果可作 为评价病毒感染或者疫苗免疫水平的依据。
主要组份与含量
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猪乙型脑炎病毒抗原包被板 |
2块板 |
5块板 |
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样品稀释液 |
60mL×1 |
180mL×1 |
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10倍洗涤液 |
125mL×1 |
240mL×1 |
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JEV HRP标记抗体 |
30mL×1 |
70mL×1 |
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TMB底物液 |
30mL×1 |
70mL×1 |
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终止液 |
20mL×1 |
40mL×1 |
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阳性对照血清 |
3mL×1 |
7mL×1 |
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阴性对照血清 |
3mL×1 |
7mL×1 |
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封板膜 |
2张 |
5张 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
注意事项
1） 试剂盒储存条件为2-8℃。开启前应确认其批号及有效期。
2） 过期产品请勿使用，不同批号的试剂盒组份禁止混用。
3） 试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温（25±3℃），使用 后放置2-8℃保存。
4） 应注意避免向试剂盒中引入污染。
5） 实验所用仪器（如：微量移液器，恒温培养箱，ELISA洗板机， 酶标仪）需要在使用前进行功能检查，确保其可用性、准确 性。
6） 所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按 国家规定进行无害化处理。
7） 移液器吸头必须一次一换。
8） 未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。
9） 试剂盒中各组份容器只针对该组份使用，不可二次利用。
10) 仅供兽医诊断使用。
用法与判定
1、试剂准备
1) 所有试剂恢复至室温（25±3℃）后使用。
2) 1倍洗涤液的配制
10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释，稀释后的洗涤液 在2-8℃可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需
10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水（dH2O）。
2、样品标准
1) 尽量使用新鲜采集的血清样本。
2) 不能用于严重污染或严重溶血样本的检测。
3) 如果血清样本浑浊，需离心后取上清进行检测。
4) 检测样品可在2-8℃保存5天，长时间保存需要转移至 -20℃或更低温环境中。
3、样品稀释 样品采用2步法100倍稀释。第一步10倍稀释样品，稀释板中 每孔加入90μL样品稀释液，然后每孔加入10μL血清样品，充 分混匀；第二步再次10倍稀释，稀释板中每孔加入135μL样品 稀释液，然后每孔加入15μL第一步混匀后的样品，充分混匀。
禁止稀释阳性对照血清（PC）与阴性对照血清（NC）。
4、操作步骤
1) 将所有组份从试剂盒中取出，在恒温箱（25±3℃）中放 置至少60分钟，恢复至室温。
2) 向抗原包被板孔中加入100μL提前在稀释板中稀释后的 样品。
3) 向指定孔中分别加入100μL未稀释 的阴性对照血清 （NC）和阳性对照血清（PC）。
4) 盖上封板膜，室温（25±3℃）下孵育30分钟（±2分钟）。
5) 用ELISA洗板机或微量移液器洗板，弃去孔中液体，每孔 加300μL1倍洗涤液，洗涤三次。最后一次洗涤后将酶标 板在吸水纸上轻轻拍干，严禁各步骤之间孔板出现干燥 情况。
6) 每孔加入100μL JEV HRP标记抗体。
7) 盖上封板膜，室温（25±3℃）下孵育30分钟（±2分钟）。
8) 重复步骤5）。
9) 每孔中加入100μL TMB底物液。
10) 盖上封板膜，室温（25±3℃）下孵育15分钟（±1分钟）。
11) 每孔中加入50μL终止液，终止酶促反应。
12) 使用450nm波长测量吸光度值。
13) 结果判定与计算。
5、判定
1） 实验成立条件 阳性对照OD450nm平均值＞0.4； 阴性对照OD450nm平均值＜0.3；
如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。 2） 计算方法
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NC OD均值= |
NC1+NC2 |
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2 |
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PC OD均值= |
PC1+PC2 |
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2 |
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3） S/P值计算公式
S/P= 样品OD值-NC OD均值
PC OD均值-NC OD均值
4） 判定标准
阳性 阴性
S/P≥0.4 S/P＜0.4
11) 每孔中加入50μL终止液，终止酶促反应。
