7) 移液器吸头必须一次一换。
8) 未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。
9) 试剂盒中各组份容器只针对该组份使用,不可二次利用。
10)仅供兽医诊断使用。
用法与判定
1、试剂准备
1) 所有试剂恢复至室温(25±3℃)后使用。
2) 1倍洗涤液的配制
10倍洗涤液用超纯水进行10倍稀释,稀释后的洗涤液在 2-8℃可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水(dH2O)。
2、样品准备
1) 尽量使用新鲜采集的血清样本。
2) 不能用于检测严重污染或严重溶血的样本。
3) 如果血清样本浑浊,需离心后取上清进行检测。
4) 检测样品可在2-8℃保存5天,长时间保存需要转移至 -20℃或更低温环境中。
3、样品稀释及阴阳性对照血清稀释 样品采用2倍稀释。按照下一页“微孔板加样位置示例图”在稀 释板中每孔加入70μL样品稀释液,各孔加入70μL血清样品。 同样比例稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC),即: 在稀释板A1、B1、C1、D1孔各加入70μL样品稀释液,A1、B1孔
各加入70μL NC,C1、D1孔各加入70μL PC,充分混匀。
4、操作步骤
1) 将所有组份从试剂盒中取出,在恒温箱(25±3℃)中放 置至少60分钟,恢复至室温。
2) 按照“微孔板加样位置示例图”向抗原包被板指定孔中分 别加入100μL稀释后的样品以及100μL稀释后阴性对照 血清(NC)、阳性对照血清(PC)。
3) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育1小时(±2分钟)。
4) 用ELISA洗板机或微量移液器洗板,弃去孔中液体,每孔加
300μL 1倍洗涤液,洗涤三次。最后一次洗涤后将酶标板在 吸水纸上轻轻拍干,严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。
5) 每孔加入100μL PRV gE HRP标记抗体。
6) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育20分钟(±1分钟)。
7) 重复步骤4)。
8) 每孔中加入100μL TMB底物液。
9) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育15分钟(±1分钟)。
10)每孔中加入50μL终止液,终止酶促反应。
12)结果判定与计算。
5、判定
1) 实验成立条件 阴性对照OD450nm平均值>0.7; 阳性对照S/N平均值<0.3;
如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。 2) 计算方法
NC OD均值= (NC1+NC2) 2
3) 样品S/N值计算公式
S/N= 样品OD值 NC OD均值
4) 判定标准
阳性 |
阴性 |
可疑 |
S/N≤0.6 |
S/N>0.7 |
0.6≤0.7 |
检测结果可疑的样品,建议再次检测。
11)使用450nm波长测量吸光度值。