通用名称:猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ELISA抗体检测试剂盒

商品名称:无

英文名称: Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus (PRRSV) Ab ELISA kit

汉语拼音: Zhu Fanzhiyuhuxizonghezheng Bingdu ELISAKangti Jianceshijhe

作用与用途

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是-种病毒性疾病,典型的临床症状为繁殖障碍和呼吸道症状。该疾病每年都会给生猪养殖业造成严重的经济损失。

免痘过猪繁殖与呼吸综合征疫苗或感染过野毒的猪均会产生特异性抗体,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ELISA抗体检测试剂盒可以检测出猪血清或血浆中的特异性RRSV抗体。

本试剂盒采用间接ELISA方法,酶标板包被猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组N蛋白抗原,可通过PRRSV HRP标记抗体来检测该病毒的特异性抗体。本试剂盒适用于检测PRRSV|型(欧洲型)和PRRSV I型(美洲型)病毒产生的抗体,同时也适用于检测群体样本。

主要组份与含量
猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原包被板：5块板
样品稀释液：180mLX1
10倍洗涤液：240mLx1
PRRSV HRP标记抗体：70mLX1
TMB底物液：70mLX1
终止液：40mLX1
阳性对照血清：7mLX1.
阴性对照血清：7mLX1.
封板膜：5张
说明书：1份
注意事项
1)试剂盒储存 条件为2-8℃.开启前应确认其批号及有效期。

2)过期产 品请勿使用,不同批号的试剂盒组份禁止混用。
3)试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温(25±3℃),使用后放置2-8℃保存。
4) 应注意避免向试剂盒中引入污染。

5)实验所用仪器 (如:微量移液器，恒温培养箱, ELISA洗板机,酶标仪)需要在使用前进行功能检查,确保其可用性、准确性。

6)所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。

7) 移液器吸头必须一次一换。

8)未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。

9)试剂盒中 各组份容器只针对该组份使用,不可二次利用。

10)仅供兽医诊断使用。

用法与判定

1.试剂准备

1)所有试剂恢复至室温(25土3℃)后使用。

2)1倍洗涤液的配制

10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释,稀释后的洗涤液在2-8°C可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL 10倍洗涤液加90ml超纯水(dHzO)。

2、样品准备

1) 尽量使用新鲜采集的血清样品。

2) 不能用于检测严重污染或严重溶血的样品。

3)如果血清样本浑浊,需离心后取上清进行检测。

4) 检测样品可在2-8*C保存5天,长时间保存需要转移至-20°C或更低温环境中。

3.样品稀释

按50倍稀释样品。在稀释板中每孔加入245μL样品稀释液,各孔加入5μL血清样品,充分混匀。禁止稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC)。

4.操作步骤

1)      将所有组份从试剂盒中取出,在恒温箱(25土3°C)中放置至少60分钟，恢复至室温。

2)向抗原 包被板孔中加入100uL提前在稀釋板中稀釋后的祥品。
3)向指定孔中分別加入100uL未稀釋的明性対照血清(NC)和旧性対照血清(PC〉。
4)盖 上封板膜，室温(25士3℃)下孵育30分狆(±2分狆)。

5)用ELISA洗板机或微量移液器洗板， 弃去孔中液体,毎孔加300uL 1倍洗条液,洗条3次。最后- -次洗滌后將酵棕板在吸水紙.上経軽拍干,声禁各歩驟之囘孔板出現干燥情况。

6) 毎孔加人100uL PRRSV HRP祢杞抗体。警告:倒出瓶的HRP柝記物禁止再次装入瓶中,以防止HRP酵受汚染而使其活性降低。
7盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育30分狆(±2分钟)。

8）重复步骤5)。

9)每孔中加入100μL TMB底物液。

10)盖上封板膜,室温(25±3°C)下解育15分钟(±1分钟)。11)每孔中加入50μL终止液, 终止酶促反应。

12)使用450nm波 长测量吸光度值。

13)结果判定与计算。

5.判定

1)实验成立条件

阳性对照D50mm平均值>0.4;

阴性对照Dsonm平均值<03;

如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。

2)计算方法

NC OD均值=（NC1+NC2)/2

PC OD均值= (PC1+PC2)/2

3)样品S/P值计算公式

S/P=(样品OD值-NC OD均值)/(PC 0D均值-NC OD均值)

4) 判定标准

阳性：S/P≥0.4

阴性：S/P<0.4