广西南宁莱佛斯托生物科技有限公司

口蹄疫(FMD)主要发生于猪、牛及其他偶蹄目动物,是-种烈性传染病。口蹄疫病毒有7种主要血清型:0型、A型、C型、SAT-1、SAT-2. SAT-3以及亚洲1型。我国0型、A型病毒最为常见。

感染过口蹄疫病毒或免疫过口蹄疫疫苗的动物体内均会产生特异性中和抗体,中和表位在VP1蛋白的siteA(141-160)。通过ELISA法检测FMDV结构蛋白抗体,不仅敏感性高血清型特异性强，适用于大规模样本检测,而且还具有快速,易于操作,结果稳定的优点。

口蹄疫病毒(FMDV) A型抗体ELISA检测试剂盒采用固相阻断ELISA方法,用于检测结构蛋白抗体。包被板包被口蹄疫病毒A型抗原，如果待检样品中含有口蹄疫A型抗体,其与包被抗原结合后，将阻断HRP酶标记的A型单抗与包被抗原的结合，从而减少显色反应。本试剂盒适用于感染或免疫过的猪、牛、山羊、绵羊等各

种动物的血清检测。

主要组份与含量

口蹄疫病毒A型抗原包被板：；5块板

样品稀释液100mLX1

10倍洗涤液：240mLX1

FMDV A型HRP标记抗体：70mLX1 .

TMB底物液：70mLX1

终止液.：40mLX1

阳性对照血清：2mLX1

阴性对照血清：2mLX1

封板膜：5张

说明书：1份

注意事项

1) 试剂盒储存条件为2-8*C.开启前应确认其批号及有效期。

2) 过期产品请勿使用,不同批号的试剂盒组份禁止混用。

3) 试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温(25±3°C),使用后放置2-8°C保存。

4) 应注意避免向试剂盒中引入污染。

5) 实验所用仪器(如:微量移液器,恒温培养箱, ELISA洗板机,酶标仪)需要在使用前进行功能检查,确保其可用性、准确性。

6)所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结東后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。

7)移液器吸头必须一次一换。

8) 未用的微孔板条可装入密封袋中2-8*C保存。

9)试剂盒中各组份容器只针对该组份使用, 不可二次利用。

10)仅供兽医诊断使用。

用法与判定

1.试剂准备

1) 所有试剂恢复至室温(25士3°C)后使用。

2) 1倍洗涤液的配制10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释,稀释后的洗涤液在2- 8°C可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水(dH20)。

2.样品准备

1)尽量使用新鲜采集的血清样品。

2)不能用于检测严重污染或严重溶血的样品。

3)如果血清样本浑浊,需离心后取上清进行检测。

4)检测样品可在2-8°C保存5天, 长时间保存需要转移至-20C或更低温环境中。

3、样品稀释及阴、阳性对照血清稀释样品采用5倍稀释。按照下一页“微孔板加样位置示例图”在稀释板中加入120L样品稀释液,各孔加入30uL血清样品。同样比例稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC),即:在稀释板A1、B1、C1. D1孔各加入120μL样品稀释液, A1、B1孔各加入30μL NC, C1、D1孔各加入30μL PC,充分混匀。

4.操作步骤

1)将所有组份从试剂盒中取出,在恒温箱(25土3°C)中放置至少60分钟,恢夏至室温。

2)按照 “微孔板加祥位置示例圉"向抗原包被板指定孔中分別加入100uL稀釋后的祥品以及100uL稀后明性対照血清(NC)、阻性対照血清(PC}。

3) 盖.上封板膜,室温(25士3C)下孵育1小时（±2分狆)。

4)用ELISA洗板机或微量移液器洗板, 弃去孔中液体,毎孔加300uL 1倍洗滌液,洗条3次。最后一次洗条后將酵示板在吸水纸上轻轻拍干,声禁各歩驟之囘孔板出现干燥情况。

5)毎孔加入100uL FMDV A型HRP椋氾抗体。

6）盖上封板膜，室内温度（25±3℃）下孵育1小时（±2分钟)。

7）重复步骤4）。

8）每孔中加入100微升TNB底物液。

9)盖上封板膜，室温(25±3°C)下孵育15分钟(±1分钟)。

10)每孔中加入50μL终止液, 以终止酶促反应。
11)使用450nm波长测量吸光度值。
12)结果判定与计算。

5.判定
1)实验成立条件
阴性对照D5som平均值>0.7;
阳性对照S/N平均值<0.3;
如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。

2)计算方法
NC OD均值=NC1+NC2/2
3)样品S/N值计算公式
S/N=样品OD值/NC OD均值
4)判定标准
阳性：S/N≤0.5
阴性：S/N>0.5

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