2021年9月29日
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名称:
 
   
   
   
 
  产品名称: 口蹄疫O型液相阻断ELLSA试剂盒
  产品编号: lz025
  产品规格: 10块96反应孔
     
 
特效与功效:
 

应用范围:用于自然感染动物和人工免疫动物血清中口蹄疫O型病毒抗体的检测

特点:产品与世界口蹄疫参考实验室提高的同类产品符号率为97.5%,相关系数为0.93,回归系数为0.91.可检测血清样品100—200份

O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒
本试剂盒用于检测O型口蹄疫病毒抗体
保存:灭活的O型口蹄疫全病毒抗原和兔抗血清-20°C保存,试剂盒其他物品4°C保存
有效期:6个月

 

一 试剂盒内含物(请打开包装后仔细检查)

 说明书                            
 96孔ELISA板
 液体稀释槽
 U型96孔抗原抗体反应板
 封板膜
 灭活O型口蹄疫病毒抗原
 豚鼠抗O型口蹄疫病毒血清
 兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物
 O型口蹄疫阳性血清(已1:4稀释)
 O型口蹄疫阴性血清
 3%双氧水
 25xPBST洗涤液(稀释时准确量取)
 豚鼠抗血清稀释液
 终止液(1.25M H2SO4)
 碳酸盐缓冲液胶囊
 柠檬酸-磷酸盐缓冲液片剂
 OPD片剂
 二 器材准备(需用户自备)
 移液器:
       5-50ul移液器、0.2-10ul移液器、50-200ul移液器、50-300ul 12道移液器各一把。
  2.移液枪尖(若干)。
  3.抗原抗体反应板:微量血凝板(U型、V型均可)5块,本试剂盒配备两块,用于被检血清的稀释。
  4.无离子水或蒸馏水。
 三 试剂准备(需用户完成)
 1. 包被缓冲液(PH9.6)
      将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末倒入100ml无离子水中即可。4°C存放,1个月内有效。
 洗涤液(PBST)
      将本试剂盒配备的25倍浓缩PBST液(可能有结晶形成,用时微热融化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释.(如果PH降低,务必用NaOH调至7.4)
 3. 底物溶液
       取1片柠檬酸-磷酸盐片剂(本试剂盒配备)溶于100ml无离子水中,溶化后,取50ml溶液,再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装(5ml/瓶或10ml/瓶),避光-20°C保存。用前避光融化,临用时每10ml上述溶液加100ul本试剂盒配备的3%双氧水(H2O2).  务必加双氧水!
四 操作步骤
 1. 包被ELISA板:用包被缓冲液稀释口蹄疫O型兔抗血清至工作浓度(1:1000),每孔加50ul。震荡2-3分钟封板膜封板或湿盆中室温过夜。
 抗原抗体(对照血清及待检血清)反应
根据不同需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。
稀释血清:以图1为例操作,在U型血凝板上按50ul/孔量用PBST工作液将待检血清从1:4开始做2倍连续稀释至1:512.同时,按图示稀释阴阳性对照血清,然后每孔加入50ul用PBST稀释到使用浓度的O型口蹄疫病毒抗原(1:4)(即用1份病毒抗原加3份PBST),病毒抗原对照孔加100ul。振荡混匀,封板,4°C过夜。加入病毒抗原后血清的实际稀释度变为从1:8开始的2倍连续稀释度。(如图1所示)
用洗涤液(1xPBST)洗ELISA板5次,在吸水纸上甩干,抗原抗体反应板从4°C取出室温放置5 分钟后,将各孔血清病毒混合物按次序转移至ELISA板上,每孔50ul,封板,37°C温育1小时。
 同上洗板5次,甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释豚鼠抗O型口蹄疫病毒血清至工作液(1:1000),每孔加50ul,封板,37°C,温育1小时。
 同上洗板5次,甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作液度(1:500),每孔加50ul,37°C温育1小时。
 同上洗板5次,每孔加50ul底物溶液,37°C温育15分钟。每孔再加50ul 1.25mol/LH2SO4终止反应,立即在492nm波长下读取光吸收值(D492nm值)。
 
 五 结果判定
 试验认可标准
     每次试验,每板孔必须设病毒抗原对照和阴阳性血清。病毒抗原对照至少两个孔的D492nm值为1.0以上,最好在1.0-2.0范围内;阳性对照抗体滴度应是1:1024±1滴度;阴性对照抗体滴度小于1:4.
 病毒抗原对照平均D492nm值50%计算(临界值)
 抗原对照是4孔,弃去最高和最低D492nm值,计算剩余2孔的平均D492nm值,再除以2,即50%对照值。该值即为临界值,表示了阻断50%反应的对照D492nm值。
结果判定
 以病毒抗原对照平均D492nm值的50%为临界值,被检血清稀释孔D492nm值大于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均D492nm值为1.2,则其50%为0.6.若某一待检血清在1:128时D492nm值为0.6,则 该份血清的抗体滴度为1:128.若临界值处于两个滴度之间。如处于1:64与1:128之间。则抗体滴度取中间值为1:90.
 
 ELISA抗体滴度与免疫动物攻毒保护的关系:牛、养:抗体滴度≥1:128,99%以上保护;<1:16不保护;1:22-90,50%保护。猪:≥1:64.99%以上保护;<1;4不保护;1:4-45,50%保护。
 
 
 
 
 
  
 
 

 
 
   
 
 

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